濒危名贵药用霍山石斛类原球茎液体培养生产活性多糖的研究2025|PDF|Epub|mobi|kindle电子书版本百度云盘下载

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第1章 药用石斛资源及其可持续利用现状1

1．药用石斛应用及其资源现状1

2．药用石斛资源再生现状7

2.1 药用石斛的野生变家种9

2.2 药用石斛的组织培养9

3．药用石斛化学成分及药理作用12

4．课题构想16

第2章 霍山石斛类原球茎组织培养系的建立33

1．实验材料33

1.1 主要试剂33

1.2 主要仪器34

2．实验方法35

2.1 霍山石斛无菌苗的诱导35

2.2 霍山石斛类原球茎的诱导35

2.3 类原球茎增殖35

2.4 霍山石斛类原球茎长期继代培养的品质稳定性考察35

2.5 数据统计39

3．实验结果39

3.1 霍山石斛类原球茎的诱导39

3.2 霍山石斛类原球茎的增殖41

3.3 霍山石斛类原球茎的品质稳定性分析42

4．讨论45

第3章 霍山石斛多糖增强机体免疫功能的研究53

1．实验材料53

1.1 霍山石斛53

1.2 实验动物53

1.3 主要试剂54

1.4 主要仪器54

2．实验方法55

2.1 HPS的提取及含量测定55

2.2 HPS的DEAE—Cellulose分级分离55

2.3 RPMI—1640培养液配制方法55

2.4 HBSS液的配制55

2.5 脾细胞悬液的制备56

2.6 腹腔巨噬细胞悬液的制备56

2.7 HPS联合Con A 诱导小鼠脾细胞产生IFN—γ57

2.8 HPS联合LPS诱导小鼠腹腔巨噬细胞产生TNF—α57

2.9 总RNA的提取57

2.1 0 RT—PCR58

2.1 1统计分析58

3．实验结果59

3.1 霍山石斛HPS的提取和蛋白脱除59

3.2 野生霍山石斛HPS对小鼠脾细胞产生IFN—γ的影响59

3.3 野生霍山石斛HPS对小鼠脾细胞IFN—γ mRNA表达的影响60

3.4 野生霍山石斛HPS对小鼠腹腔巨噬细胞产生TNF—α的影响61

3.5 野生霍山石斛HPS对小鼠腹腔巨噬细胞TNF—α mRNA表达的影响61

3.6 野生霍山石斛HPS不同组分的活性61

3.7 野生霍山石斛多糖与类原球茎多糖组分及生物学活性比较63

4．讨论64

第4章 霍山石斛类原球茎液体培养碳氮代谢分析69

1．实验材料69

1.1 霍山石斛类原球茎69

1.2 主要试剂70

1.3 主要仪器70

2．实验方法70

2.1 类原球茎悬浮培养与生长的测定70

2.2 多糖提取和含量测定71

2.3 可溶性糖含量的测定71

2.4 蔗糖磷酸合成酶（SPS，EC 2.4.1.1 4）、蔗糖合成酶（SuSy，EC 2.4.1.1 3）和蔗糖酶（IT，EC 3.2.1.2 6）活性的测定71

2.5 可溶性离子NH？、NO？的含量测定72

2.6 硝酸还原酶（NR，EC 1.6.6.1 ）、谷氨酸合酶（GOGAT，EC 1.4.1.1 4）和谷氨酰胺合成酶（GS，EC 6.3.1.2 ）活性的测定73

2.7 实验参数74

3．实验结果74

3.1 霍山石斛类原球茎的生长动态进程74

3.2 pH的动态变化76

3.3 胞内、胞外糖消耗的动态进程76

3.4 碳源代谢关键酶活性的动态变化77

3.5 胞内、胞外NH？和NO？消耗的动态进程77

3.6 氮源代谢相关酶活性的动态变化79

4．讨论80

第5章 霍山石斛类原球茎生长和多糖合成调控87

1．实验材料87

1.1 霍山石斛类原球茎87

1.2 主要试剂87

1.3 主要仪器88

2．实验方法88

2.1 类原球茎悬浮培养与生长的测定88

2.2 生长培养基优化方案设计88

2.3 多糖合成调节方案设计88

2.4 多糖提取与含量测定89

2.5 可溶性糖含量的测定89

2.6 霍山石斛多糖的DEAE—Cellulose分级分离与含量测定89

2.7 霍山石斛类原球茎多糖的生物学活性评价89

2.8 实验参数89

3．实验结果90

3.1 类原球茎生长培养基的优化90

3.2 HPS合成的调控94

3.3 优化和调控条件下的HPS组分及生物活性评价98

4．讨论98

第6章 霍山石斛活性多糖的分离纯化及结构表征106

1．实验材料107

1.1 霍山石斛类原球茎107

1.2 主要试剂107

1.3 主要仪器108

2．实验方法108

2.1 HPS的提取和DEAE—Cellulose分级分离108

2.2 HPS—1的凝胶渗透色谱纯化109

2.3 多糖组分活性测定109

2.4 多糖的纯度及摩尔分子量测定110

2.5 HPS—1B23的比旋光度的测定110

2.6 HPS—1B23的扫描电镜观察110

2.7 刚果红实验110

2.8 紫外光谱分析111

2.9 HPS—1B23单糖组成成分分析111

2.1 0红外光谱分析111

2.1 1 高碘酸氧化反应111

2.1 2 Smith降解反应112

2.1 3 多糖甲基化分析112

2.1 4 多糖的部分酸水解分析113

2.1 5 多糖的核磁共振波谱分析113

3．实验结果113

3.1 霍山石斛多糖的凝胶柱色谱分离纯化113

3.2 类原球茎多糖HPS—1B23纯度和分子量鉴定117

3.3 类原球茎多糖HPS—1B23比旋光度的测定118

3.4 类原球茎多糖HPS—1B23的表观形态学观察118

3.5 刚果红实验分析118

3.6 类原球茎多糖HPS—1B23紫外光谱分析118

3.7 类原球茎多糖HPS—1B23单糖组成成分分析121

3.8 类原球茎多糖HPS—1B23红外光谱分析123

3.9 类原球茎多糖HPS—1B23相邻单糖连接方式的分析124

4．讨论135

第7章 结论140